ATCC細胞操作指南

細胞和細胞株

凍存的ATCC 細胞株和雜交瘤細胞株通過干冰運輸。收到凍存細胞后，需立即解凍復蘇，去除二甲基亞砜（DMSO）后進行細胞培養。

如果不立即復蘇培養細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣

凍存細胞的復蘇和培養

1. 準備細胞培養皿或細胞培養瓶，及產品說明書推薦的相應細胞培養基，平衡溫度和pH（CO2），37℃水浴加熱細胞培養基。

2. 小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴，輕微攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快，

短于2分鐘或待最后一塊小冰晶體剛融化，即將細胞凍存管取出水浴。

3. 給取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用無菌紙或紗布拭干。之后的操作步驟應在生物安全柜中無菌操作。

4. 小心擰開凍存管的頂部，將管內容物用1 mL移液槍轉移到含9 mL培養基的無菌離心管中。離心5到7分鐘（125 × g ），

小心吸去上清液以去除抗凍劑（DMSO），避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于1或2 mL配好的培養基中。將細胞懸液轉移到含有

培養基的培養容器，輕輕搖晃使細胞均勻分布。生長較慢的細胞株可重懸于5～8 mL培養基并轉移到T25培養瓶。

生長較快的細胞株可重懸于12～20 mL培養基并轉移到T75培養瓶。ATCC記載有各細胞株的具體生長狀況及培養方法。

5. 將細胞培養容器置于細胞培養箱，在37℃，5%二氧化碳濃度的培養條件下進行孵育。細胞培養24小時后在顯微鏡下觀察細胞形態和生長

狀況（請參閱: *注2）。

*注1：雖然大多數細胞株可以在一種以上的培養基中生長，但細胞的特征可能會在更換不同種培養基時發生變化。為保證最佳效果，

請用ATCC推薦的培養基培養細胞，若配套培養基不能購買，ATCC可以提供培養基配方。

*注2：某些細胞株，如雜交瘤株，可能需要幾天的時間才從凍存狀態下恢復正常生長。細胞復蘇培養第一天可能會呈現較低的細胞活力

并產生一些細胞碎片。度過這一時期后，細胞會恢復并進入指數增長期。相層存儲。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。

如果溫度不夠低，高于-130℃，細胞活力會迅速下降。