慢病毒感染細胞|為什么你的感染效率那么差?

慢病毒不但可感染分裂或非分裂細胞，還可將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實現(xiàn)持久表達，

又不易引發(fā)機體免疫反應(yīng)，被譽為細胞實驗佳選的工具病毒。

并且慢病毒作為基因治療載體在各類遺傳性和后天性的人類疾病的治療中倍受歡迎：從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用，高純度、高滴度的慢病毒都是基因操作的理想工具。

由于實驗中使用的細胞類型不同，慢病毒感染的效率也會有差異；要想提高慢病毒的感染效率，合適的實驗步驟和最佳的實驗條件是成功的關(guān)鍵！

以“24孔培養(yǎng)板、貼壁細胞"為例，慢病毒感染細胞的常規(guī)操作步驟是這樣的：

Day 0

接種細胞：

每孔按5×個待感染細胞鋪板，用含有 10% FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng);

Day 1

細胞感染：

感染前，根據(jù)說明書用培養(yǎng)基配置感染液，備用吸掉舊培養(yǎng)基，更換為感染液; 并參考細胞 MOI值，計算病毒使用量，加入病毒進行感染，混勻;

Day 2

病毒感染8-16h后，換回常規(guī)培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng);

Day 3-4

確認感染效果：

感染72h后，顯微鏡下觀察感染效果，如EGFP、Cherry的表達情況；

如果你以為所有的細胞操作都這么簡單的話，那真的是too young too simple！

那么在慢病毒感染細胞過程中，到底會遇到哪些問題呢？

在細胞感染時， MOI是一個非常重要的指標(biāo)，如何確定MOI值呢？

MOI:復(fù)感染指數(shù)，是指病毒對細胞的感染能力，MOI越高，細胞越難被感染。通常把某株細胞有80%被感染時所用的病毒顆粒數(shù)和細胞數(shù)目

的比值作為該株細胞的MOI。

MOI=（病毒滴度×病毒體積）/細胞數(shù)目

感染條件及MOI的選擇原則：

1. 在細胞形態(tài)不受影響的情況下盡可能用少的病毒感染細胞

2. 選擇感染效率80%左右的作為最佳感染條件

通過細胞感染預(yù)實驗可以知道慢病毒對細胞的最佳感染條件，來確定細胞的MOI，進行正式實驗。